大（小）鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書   大（小）鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書

【產品規(guī)格】

200ml/Kit

【產品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：

【實驗前準備】

適用儀器：zui大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

1取一支 15ml 離心管，先加入中性粒細胞分離液試劑 A：3ml，后加入 80%濃度試劑 A溶液（中性粒細胞分離液試劑 A：樣本稀釋   液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。

2制備血液樣本：抗凝血液與紅細胞沉降液按 1：1 比例混勻后，小心加于分離液梯度界面之上，800g 離心 20min。

3離心后，血漿層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細胞層，取下層白色環(huán)狀中性粒細胞層（會有少量紅細胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。

4離心后棄上清，后可通過兩種方法去除紅細胞。

方法一：細胞沉淀用紅細胞裂解液去除紅細胞（具體方法參見“紅細胞裂解液說明書”）。

方法二：

1細胞沉淀用 1ml 紅細胞沉降液重懸，加于 3ml 中性粒細胞分離液試劑 A 之液面上，400g 離心 20min。

2取白色環(huán)狀細胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復洗滌 2-3 次，獲得目的細胞（如仍有少量紅細胞混雜，使用紅細胞裂解液去除紅細胞）。

【注意事項】

1全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得*的實驗結果，在取血 2h 內進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

2本實驗不使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

3分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。

4請勿使用具有紅細胞保護成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細胞不能*沉至離心管底部）。

【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。

【相關實驗技術方案】

1所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術。

2所獲得中性粒細胞的核酸提取技術。

3所獲得中性粒細胞的鑒定方法

A.流式細胞技術

B.免疫組化技術

C.原位雜交技術

D.PCR 技術

【可能存在的問題及解決方法】

1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

?2本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離心時間，對離心轉速進行調整。

3本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產同類產品略有不同，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。

注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到*分離效果，離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。