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更新時間：2013-01-08 
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開始之前 請閱讀完整的手冊，以熟悉的EZgene TM 96孔的血液DNA試劑盒過程。1。準備一個足夠的的洗脫緩沖和分裝成部分的蛋白酶K原液。存儲每個等分試樣在-20℃下，在使用前解凍。每個樣品，將要求25μL該溶液。升 GD2815-00溶解洗脫緩沖液2.5毫升升 GD2815-01與10 mL的洗脫緩沖液溶解升 GD2815-02溶解50.0毫升洗脫緩沖液2。如下，儲存在室溫下用無水乙醇稀釋DNA濃縮洗滌緩沖液。升 GD2815-00加入160毫升（96％-100％）乙醇升 GD2815-01加入640毫升（96％-100％）乙醇升 GD2815-02加入乙醇，每瓶640毫升（96％-100％）3。預熱洗脫緩沖液在65℃下4。調整到250μL的樣品的體積。小于250μL的樣品，加入適當體積的PBS 250μL。對于大于250μL的樣品，每個樣品拆分成兩個取250μL，并使用1.2 mL圓底孔板溶解的兩口井。到96孔DNA板的各孔中裝入合并的溶胞產物。 儲存的血液樣本沒有以前的治療的血液樣本的存儲導致產量減少的基因組DNA。的結果，血標本應作如下處理，l對于短期存儲（一個星期），在含有EDTA抗凝管收集血液，并儲存于4°C。l對于長期儲存，收集管中的血液中含有一種抗凝血劑，并儲存在-70°C。解凍冷凍血液樣本，在37°C，使用前輕輕攪拌。 EZgene TM 96 - 井血液DNA協議 1。免除25 μL 蛋白酶K（20 毫克/毫升），每孔1.2 mL圓底孔板的底部。每個樣品標記的位置。2。井的內部，而不接觸輪輞與前端部（zui多6 x 10 6淋巴細胞或培養的細胞在PBS中可以通過觸摸到圓形孔深孔板的各孔中添加250μL的全 血，血清或體液各孔中使用）。注：樣品體積小于或大于250μL，調整樣品體積250μL PBS（開始之前第4頁上的詳細信息，請參閱“）。3。每個樣品中加入250μL緩沖液BL。避免接觸的輪輞井的提示，這可能會導致交叉污染。可選：添加5μL的核糖核酸酶A每口井每250μL 緩沖液BL。添加緩沖BL /核糖核酸酶A組合，以每口井。4。密封圓形孔板上限（提供）*混合樣品，振蕩30秒或用力搖動板（邊到邊）。注意：搖動機架一側到另一側。為了防止可能出現的泄漏周圍微管帽，不搖板和失望。5。在2000 XG短暫離心收集任何樣本，帽子。6。孵育樣品在65℃的培養箱中或烤箱10分鐘。混合孵化過程中偶爾輕輕地旋轉板。注意：切勿劇烈振蕩的樣品超過20分鐘。7。在2000年XG短暫離心收集任何解決方案，從帽。取出微管帽。向每孔中加入2 6 0μL 的無水乙醇（96-100％） 。8。密封圓形孔板使用新上限（提供）。9。將樣品混合，通過渦旋或用力搖動1分鐘的板（從一側到另一側）。在2000年XG短暫離心收集任何液體的上限。10。將DNA板頂部的2毫升96孔收集板（提供）。馬克的96孔DNA板，以便后面識別。11。傳輸從步驟10到96孔DNA板的各孔中的所有樣品。12。用密封膜密封的96孔DNA板。離心在5000 XG 5-10分鐘。確保所有的樣品已通過膜的DNA板的各孔中。13。丟棄流過的96孔收集板。刪除的粘合膜的蓋子，然后在各孔中添加400μL緩沖液KB。14。密封板與新的密封膜，并在5000×g離心5分鐘，然后離心處理，以使板。丟棄流過的96孔收集板。15。取出的密封膜的蓋子，然后在各孔中添加700μLDNA洗滌緩沖液。注：即DNA洗滌緩沖液濃縮物和被提供作為瓶或第4頁上所示，必須用無水乙醇稀釋。如果是冷藏保存，稀釋的洗滌緩沖液必須冷卻至室溫后再使用。16。密封板與新的密封膜，并在3000-5000 xg離心5分鐘，然后離心處理，以使板。丟棄的流量，通過在96孔收集板。17。卸下粘接膜蓋和在各孔中添加600μLDNA洗滌緩沖液。將DNA的2毫升收集板的頂部板96孔，96孔DNA板密封與 ??一個新的密封膜和離心機在馬克西速度（5,000 xg離心）10分鐘。18。取出的密封膜，并在真空烘箱中或在70℃的培養箱預置為8分鐘，干燥膜孵育96孔DNA板。注意：這些干燥步驟用于除去的微量乙醇，否則可能會干擾與下游應用是至關重要的。19。將96孔DNA板之上的新的安裝機架的微管（附帶）。添加200μL洗脫緩沖液在65℃下預熱96孔DNA板的各孔中。兩到四分鐘，在室溫下孵育，或在孵化器設定在65℃的一到兩分鐘。20。與一個新的密封膜密封96孔DNA板和離心處理，以使板在5,000 xg離心5分鐘，以洗脫DNA。注： *次洗脫通常會產生60％-70％的DNA綁定到列。另外200μL洗脫緩沖液可以產生另外的20％。 低于50μL的卷，大大降低了產量。
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