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免疫佐劑之種類及配置使用方法

更新時(shí)間:2009-12-18      瀏覽次數(shù):3956

免疫佐劑       

促進(jìn)抗體產(chǎn)生的抗原輔助劑。 又稱非特異性免疫增生劑。本身不具抗原性,但同抗原一起或預(yù)先注射到機(jī)體內(nèi)能增強(qiáng)免疫原性(見(jiàn)抗原)或改變免疫反應(yīng)類型。 種類很多,目前尚無(wú)統(tǒng)一的分類方法,常用的佐劑可分為4類:無(wú)機(jī)佐劑,如氫氧化鋁,明礬等;有機(jī)佐劑,微生物及其產(chǎn)物如分枝桿菌(結(jié)核桿菌、卡介苗)、短小桿菌、百日咳桿菌、內(nèi)毒素、細(xì)菌提取物(胞壁酰二肽)等;合成佐劑,如人工合成的雙鏈多聚核苷酸(雙鏈多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、異丙肌苷等;油劑,如費(fèi)氏佐劑、花生油乳化佐劑、礦物油、植物油等。弗氏佐劑目前在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中zui常用,又可分為弗氏不*佐劑和*佐劑兩種。不*佐劑是油劑(石蠟油或植物油)與乳化劑(羊毛脂或吐溫(Tween)80)相混合而成,當(dāng)其再與抗原混合,即成油包水乳劑,可用于免疫注射。在不*佐劑中加入死的分枝桿菌,即成為弗氏*佐劑。*佐劑的免疫強(qiáng)度大于不*佐劑。該佐劑主要用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),不適宜于人類使用。而且動(dòng)物多次注射后也常會(huì)發(fā)生佐劑病。
  免疫佐劑的生物作用包括:
  (1)抗原物質(zhì)混合佐劑注入機(jī)體后,改變了抗原的物理性狀,可使抗原物質(zhì)緩慢地釋放,延長(zhǎng)了抗原的作用時(shí)間;
  (2)佐劑吸附了抗原后,增加了抗原的表面積,使抗原易于被巨噬細(xì)胞吞噬;
  (3)佐劑能刺激吞噬細(xì)胞對(duì)抗原的處理;
  (4)佐劑可促進(jìn)淋巴細(xì)胞之間的接觸,增強(qiáng)輔助T細(xì)胞的作用;
  (5)可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。故免疫佐劑的作用可使無(wú)免疫原性物質(zhì)變成有效的免疫原;
  (6)可提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴變;
  (7)改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),并使其增強(qiáng)。
  具備條件
  佐劑的條件作為一種良好的佐劑,必須具備下列條件:
  (1)增加抗原的表面積,并改變抗原的活性基團(tuán)構(gòu)型,從而增強(qiáng)抗原的免疫原性;
  (2)佐劑與抗原混合能延長(zhǎng)抗原在局部組織的存留時(shí)間,減低抗原的分解速度,使抗原緩慢釋放至淋巴系統(tǒng)中,持續(xù)刺激機(jī)體產(chǎn)生高滴度的抗體;
  (3)佐劑可以直接或間接激活免疫活性細(xì)胞并使之增生,從而增強(qiáng)了體液免疫、細(xì)胞免疫和非特異性免疫功能;
  (4)良好的佐劑應(yīng)具有無(wú)毒性或副作用低的特點(diǎn)。
  常用佐劑的種類和制備
  佐劑主要可分為兩種:一種本身具有免疫原性,如百日咳桿菌、抗酸桿菌(結(jié)核分枝桿菌)以及革蘭陰性桿菌等;另一種本身無(wú)免疫原性,如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。目前應(yīng)用zui多的是弗氏佐劑(Freundadjuvant)。
  1.弗氏佐劑
  弗氏佐劑是目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中zui常用的佐劑,分為不*弗氏佐劑和*弗氏佐劑。不*弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成,組分比為1~5:1,可根據(jù)需要而定,通常為2:1。不*佐劑中加卡介苗(zui終濃度為2~20mg/ml)或死的結(jié)核分枝桿菌,即為*弗氏佐劑(FCA)。一般注射時(shí)用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進(jìn)行乳化,第二次或第三次注射時(shí)用不*佐劑或不用佐劑。如不加佐劑,則抗原量增大10-20倍。
  配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保存?zhèn)溆谩?br />  在免疫動(dòng)物前,先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合,佐劑和抗原體積比一般為1:1,制備成"油包水"乳狀液。因?yàn)楹琒DS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復(fù)合物,注射入動(dòng)物體內(nèi)時(shí)一定要保持乳化狀態(tài)。抗原用量視抗原分子量不同及免疫原性及免疫動(dòng)物不同而有一定差異,無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和固定模式。一般是每兔(約2kg重)或每羊(約20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,zui多每次不超過(guò)3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進(jìn)行:
  (1)研磨法:先將佐劑加熱并取適量放入無(wú)菌的玻璃研缽內(nèi),待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液,邊滴邊按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,繼續(xù)研磨一段時(shí)間,使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原,缺點(diǎn)是研缽壁上粘附大量乳劑,抗原損失較大。
  2)注射器混合法:將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個(gè)注射器內(nèi),兩注射器之間以一細(xì)膠管相連,注意排凈空氣,然后交替推動(dòng)針管,直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點(diǎn)是容易做到無(wú)菌操作,抗原損失少,適用于制備少量的抗原乳劑。但同時(shí)難以乳化*,個(gè)別抗原,用塑料注射器根本推不動(dòng),而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴狀浮于水面,即乳化*,為合格的油包水劑。
  (3)超聲:實(shí)驗(yàn)室條件好點(diǎn)的,比如說(shuō)有超聲破碎儀的,一定要控制超聲頻率和時(shí)間,超聲容易激發(fā)一些自由基,對(duì)抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。
  2.氫氧化鋁佐劑
  取5%硫酸鋁溶液250ml,在強(qiáng)烈攪拌下加入5%氫氧化鈉溶液100ml,用生理鹽水離心洗滌沉淀2次,再懸入生理鹽水中使達(dá)250ml。免疫接種時(shí),取適量氫氧化鋁佐劑加等體積抗原即可免疫。
  3.明礬佐劑
  鉀鋁礬(硫酸鋁鉀)在一定pH條件下產(chǎn)生氫氧化鋁膠體吸附抗原而產(chǎn)生佐劑效應(yīng)。制備方法是用生理鹽水溶解蛋白質(zhì)抗原,在攪拌下緩慢滴入一定量10%硫酸鋁鉀溶液,用NaOH調(diào)pH到6.5,此時(shí)溶液變成乳狀懸液,離心后去掉上清液,沉淀用生理鹽水洗滌二次,加入硫柳汞防腐,4℃保存?zhèn)溆谩C鞯\佐劑一般用于肌肉注射,皮下注射容易引起肉芽腫和膿腫。
  4.脂質(zhì)體
  脂質(zhì)體包封抗原后,可使抗原延緩釋放,并且脂質(zhì)體顆粒有刺激機(jī)體免疫反應(yīng)的作用。因此,用脂質(zhì)體包封的抗原免疫動(dòng)物可提高免疫效果。

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