實(shí)驗(yàn)室透析常見(jiàn)問(wèn)題解答（三）

Q1：關(guān)于膜表面積和樣品量之間的關(guān)系有沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)法則？

表面積與體積的比值取決于膜管扁平寬度。如果有兩段相同長(zhǎng)度的膜管，扁平寬度較小的膜管具有較高的比表面積，而扁平寬度較大的膜管比表面積相對(duì)較小，也就是說(shuō)，前者的透析速率更快。原因是扁平寬度較小的膜管，溶質(zhì)的擴(kuò)散距離較短，溶質(zhì)之間通過(guò)膜孔的競(jìng)爭(zhēng)也較小。而扁平寬度大，亦即溶質(zhì)到達(dá)膜表面的距離也較長(zhǎng)，溶質(zhì)之間對(duì)膜孔的競(jìng)爭(zhēng)也較大。一般而言，比表面積越大，透析越快。

Q2：如果膜兩側(cè)的摩爾滲透壓濃度相等，但濃度梯度仍然存在，物質(zhì)的通過(guò)效率如何？

大多數(shù)透析結(jié)束時(shí)膜兩側(cè)滲透壓相同。透析過(guò)程是由膜管內(nèi)外兩側(cè)的濃度梯度驅(qū)動(dòng)的。如果滲透壓力有很大的差別，水會(huì)通過(guò)膜以平衡膜兩側(cè)的滲透壓。如果過(guò)多的水通過(guò)膜，透析膜管可能會(huì)隨水運(yùn)動(dòng)的方向增大或縮小，在體積增加到一定程度時(shí)，有可能導(dǎo)致膜夾松動(dòng)或膜管破裂。

Q3：進(jìn)行超濾時(shí)，透析膜能承受多大的壓力？

透析膜設(shè)計(jì)不適合用于壓力過(guò)濾。在不影響截留分子量的前提下，zui大推薦壓力為1.5 psi。

Q4：一般推薦使用哪種透析液（緩沖液）？

生物分子必須保存在嚴(yán)格的pH值控制條件下，以穩(wěn)定其分子極性。典型的透析緩沖液pH范圍為6-8。以下為常用的幾種可以作為緩沖液的生化溶液：

• 水
• PBS
• TBS
• HEPES
• 氨基酸緩沖液

Q5：為什么使用微米vs道爾頓（MW）單位，怎么轉(zhuǎn)換？

溶解的分子大小以分子量來(lái)定義，單位為道爾頓，而顆粒和細(xì)胞大小常以直徑來(lái)定義，由于分子的結(jié)構(gòu)和形態(tài)不同，相同分子量的物質(zhì)，分子大小和形態(tài)可能相差較大，兩者之間沒(méi)有的對(duì)應(yīng)關(guān)系。出于這個(gè)原因，許多常見(jiàn)的生物材料都已特別定性，并將大約的尺寸標(biāo)注在轉(zhuǎn)換表上作為估算的參考，以用于透析、超濾和微濾應(yīng)用。道爾頓與微米單位之間的轉(zhuǎn)化見(jiàn)圖。

Q6：對(duì)于鹽濃度較高的樣品，*的透析方法是什么？

如果可能，我們推薦使用低鹽濃度的緩沖液。不推薦直接使用純DI水作為緩沖液，因?yàn)闈B透壓力可能將水引入膜管，使樣品體積膨脹并可能導(dǎo)致膜管破裂。使用一系列濃度逐漸降低的溶液作為緩沖液可防止?jié)B透壓力導(dǎo)致的膜管膨脹。每次緩沖液置換，可將溶質(zhì)濃度降低十分之一，也就是說(shuō)，透析一個(gè)5M NaCl的樣品，可使用500 mM NaCl的緩沖液。

Q7：可以使用繩子結(jié)扎膜管，而不使用膜夾嗎？

我們不推薦使用繩子結(jié)扎膜管。因?yàn)槔K結(jié)對(duì)膜管的損害具有很大的不確定性，并且可能不能提供有效的密封，而導(dǎo)致泄露。只有膜夾才能提供足夠的密封性，從而保護(hù)樣品。

Q8：透析膜管應(yīng)該剪多長(zhǎng)？

對(duì)于每種膜管扁平寬度，spectrumlabs提供相關(guān)的容積/長(zhǎng)度比，可方便計(jì)算透析樣品所需的膜管長(zhǎng)度。如果扁平寬度為16 mm，容積/長(zhǎng)度比為0.79 ml/cm，要容納5 ml的樣品，則需要大約6.5 cm長(zhǎng)的膜管。但是，為保持樣品漂浮，一般需要在頂部空間預(yù)留10-20%膜長(zhǎng)（約為1 cm）。此外，也需在兩端為膜夾各預(yù)留2 cm。所以總的膜管長(zhǎng)度應(yīng)至少為11.5 cm。

可根據(jù)以下公式計(jì)算膜管長(zhǎng)度：

總長(zhǎng)度=（樣品體積）/（容積/長(zhǎng)度）+（額外的10-20%）+4 cm

根據(jù)樣品體積和扁平寬度，計(jì)算所需的膜管長(zhǎng)度。